• FLIM, FRET, FCS的交钥匙系统
• 紧凑、易用、免维护的组件，所有的升级系统各个配置都高度模块化，具有无限的灵活性
• 最大4通道独立探测模块的高灵敏系统
• 荧光寿命探测范围从<100 ps到微秒级别
• 高端易用、匹配多种分析方式的数据收集和分析软件
• 可用于各向异性和厚组织FLIM
• 新功能：rapidFLIM^HiRes——利用超快FLIM成像和出色的5 ps时间分辨率实现动态过程可视化

• 时间分辨荧光
• rapidFLIM - 重新定义动态FLIM成像标准
• 荧光寿命成像（FLIM）
• 磷光寿命成像（PLIM）
• 荧光相关光谱（FCS）
• 荧光寿命相关光谱（FLCS）
• 荧光互相关光谱（FCCS）
• 荧光共振能量转移（FRET）
• 脉冲交替激发（PIE）
• 激光切割/烧蚀
• 模式匹配分析
• 时间分辨光致发光（TRPL）
• TRPL 成像
• 反聚束效应
• 各向异性

机械刺激时的细胞内 Ca²⁺ 信号传递

装有 Oregon-Green-Bapta-1 的 HEK 细胞受到机械刺激后产生的细胞内 Ca2+ 信号。在这段视频中，对上面两个细胞进行了机械刺激前、刺激过程中和刺激后的成像。机械刺激导致细胞吸收钙离子。Ca2+ 浓度的增加导致 OGB-1 AM 的荧光寿命发生变化，顶部两个细胞在短时间内亮起绿光。rapidFLIM^HiRes 方法能够以每秒 5 帧 FLIM 的速度对 128 x 128 像素的样品区域进行成像，从而能够在短时间内定量观察细胞中钙离子浓度的上升。

样品详情：

• 人工脑脊液中装载了Oregon-Green-Bapta-1 (OGB-1 AM)的人类胚胎肾（HEK）细胞

实验配置：

• 128 x 128 像素，3.81 µs像素驻留时间
• 每秒 5 帧

样本和数据由 Rose 教授（德国杜塞尔多夫海因里希-海涅大学神经生物学研究所）提供

用rapidFLIM^HiRes 监测膜张力的变化

这段视频展示了用荧光探针 Fliper-TR^®（荧光脂质张量报告）对细胞膜进行染色的 MDCK 细胞。该探针嵌入密闭环境后，荧光寿命会发生显著变化。如果施加横向压力，Fliper-TR^® 会发生平面化，从而导致荧光寿命的改变，这就可以对活细胞和人工膜中的脂质成分和膜张力进行成像。在等渗条件下，Fliper-TR^® 的荧光寿命约为 5.1 ns。诱导高渗休克后，膜张力迅速降低，荧光寿命缩短。使用 rapidFLIM^HiRes 方法进行成像的速度非常快，因此可以实时记录荧光寿命的变化以及膜张力的变化。

样品详情：

• 用 Fliper-TR® 染色的麦丁-达比犬肾（MDCK）细胞膜

实验配置：

• 激发：485 nm
• 图像大小： 512 x 256 像素
• 每秒 1.0 帧

参考文献 Colom, A., Derivery, E., Soleimanpour, S. et al. A fluorescent membrane tension probe. Nature Chem 10, 1118-1125 (2018). https://doi.org/10.1038/s41557-018-0127-3

rapidFLIM - 重新定义动态FLIM成像标准

利用rapidFLIM荧光寿命成像技术，可以有效地对样品的多种动态过程进行荧光寿命成像。该技术支持下的FLIM采集过程非常迅捷，可达到每秒几帧的速度，适用于记录样品的动态过程（例如蛋白质相互作用，化学反应和离子流动），以及针对流动性高的样品的进行成像（流动性高的细胞器或颗粒，细胞的迁移等），同时还可以用于研究荧光共振能量转移的动态特性。最高每秒可获取10帧以上，具体取决于样本的亮度和图像大小。

单层囊泡具有从巨型（GUVs）到大型（LUVs）甚至到小型（SUVs）等多种尺寸。囊泡膜的柔性结构允许引入特殊标记的脂质，从而使得它们非常适合在生物物理研究中作为研究对象。因此，这种囊泡成为了研究例如模结构域的形成或脂质组织的强大模型。

到目前为止，传统获取FLIM图像都需要花费几分钟的时间，并且由于GUV的高移动性，很难对它们进行精确成像。应用rapidFLIM方法可显著减少采集时间，每秒可记录数帧。因此，即使是高度移动的GUV，也可以精确跟踪。在该示例中，将两个荧光团标记的脂质（C6-NBD-PC和N-Rhd-DOPE）掺入GUV中。在无相分离的GUV中，由于受体罗丹明的FRET过程，NBD（7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl）的寿命被强烈淬灭（低至约2 ns）。此处显示的视频包含300帧，以5.6 fps的帧率记录。

样品详细：

具有NBD和罗丹明标记的脂质的GUVs（无相分离）：DOPC + 0.5 mol % Palmitoyl-C6-NBD-PC + 0.5 mol % N-Rhd-DOPE

NBD标记的Palmitoyl-C6-NBD-PC（磷脂酰胆碱）

罗丹明标记的N-Rhd-DOPE（二油基磷脂酰乙醇胺）

实验配置：

• 激发光： 485 nm、40 MHz
• 长通滤光片： 488 nm
• 75 x 75 µm，300 x 300像素， 1 µs/像素
• 300帧，每秒5.6帧

GUV由柏林洪堡大学分子生物物理实验室的Ivan Haralampiev制备

使用荧光寿命确定脂质顺序

FLIM测量有助于区分有序和无序的膜相。在液相有序和无序之间变化时，膜染料Laurdan和di-4-ANEPPDHQ会发生荧光发射光谱蓝移以及的寿命偏移，因此它们可以用来做膜序的成像。这些图像通常采用归一化强度比图像的形式，通常称之为广义极化（GP）图。在这里，通过时间相关单光子计数（TCSPC），利用已知的激发态光物理，可以来证明这两个荧光探针的GP对比度的增强。该图显示了结合了寿命和光谱变化的Laurdan染色的固定BAEC细胞的GP图。与内部细胞室（蓝色）相比，细胞表面的质膜显示出更高的阶数（红色）。

实验配置：

结合了MicroTime 200和LSM升级套件（Leica TCS SP5）

激发光：800 nm的双光子激发，SpectraPhysics MaiTai

分析软件：SymPhoTime

澳大利亚新南威尔士大学血管研究中心Katharina Gaus提供